Создание рекомбинантного штамма Saccharomyces cerevisiae с геном эндо-β-1, 4-эндоглюконазы гриба Aspergillius niger в HO локусе хромосомы.Хромосомасының НО локусында Aspergillius niger саңырауқұлағының эндо-β-1, 4-эндоглюконаза гені бар рекомбинантты Sacc
120 54
Кілттік сөздер:
эндо-1, 4-β-глюканаза, Saccharomyces cerevisiae, геномная интеграция, экспрессия гена, ферментативная активность, гликозилирование.целлобиогидролаза, 4-β-глюканаз, Saccharomyces cerevisia, ген экспрессиясы, ферментативтік белсенділік, гликозилдену.Аннотация
Создан интегральный вектор способный включаться в HO локус хромосомы с селективным маркерным геном устойчивости к генетицину (G418), конститутивным промотором и терминатором дрожжевой глицероальдегид 3-фосфат дегидрогеназы (GAPDH). С использованием вектора для геномной интеграции получены новые штаммы дрожжей эффективно экспрессирующие эндо-1,4-β-глюканазу гриба Aspergillus niger.Показано, что подходы, использованные в данной работе, могут быть перспективными для конструирования промышленных штаммов для ферментации целлюлозосодержащего сырья. Жұмыс барысында генетицинге (G418) төзімділік көрсететін маркерлік ген KanMX4 пен ашытқы глицероальдегид 3-фосфат дегидрогеназа (GAPDH) генінің конститутивті промоторы мен терминаторына ие,хромосоманың НО локусына интеграциялануға қабілетті интегральді вектор құрастырылды. Интеграцияланушы векторларды қолдана отырып, Aspergillus niger саңырауқұлағының эндо-1,4-β-глюканаза ферментін эффективті түрде экспрессиялауға қабілетті жаңа ашытқы штаммдары алынды. Аталмыш жүмыста қолданылған амалдардың целлюлозалы шикізатты ферментациялауға қабілетті өндірістік штамдарды құрастыруда тиімділігі көрсетілді.Библиографиялық сілтемелер
3 Bhat M.K. Cellulases and related enzymes in biotechnology // Biotechnol. Adv. -2000. -V.18. -P.355-383.
4 Lynd L.R., van Zyl W.H., McBride J. E., Laser M. Consolidated bioprocessing of cellulosic biomass: an update //
Current Opinion in Biotechnology. -2005. -V.16, ‡‚ 5. .P. 577.583.
5 Van Rensburg R., Van Zyl W.H., Pretorius I.S. Engineering yeast for efficient cellulose degradation // Yeast. -1998.-V.14. -P.67.76.
6 Fujita Y., Ito J., Ueda M., Fukuda H., Kondo H. Synergistic saccharification, and direct fermentation to ethanol, of
amorphous cellulose by use of an engineered yeast strain codisplaying three types of cellulolytic enzymes// Appl.
Environ. Microbiol. -2004. -V.70. .P.1207.1212.
7 Voth W.P., Richards J.D., Shaw J.M., Stillman D.J. Yeast vectors for integration at the HO locus // Nucleic Acids
Res. -2001. .V.29, ‡‚12.
8 Herskowitz I., Rine J., Strathern J. Mating type determination and mating-type interconversion in Saccharomyces
cerevisiae. In: The Molecular and Cellular Biology of the Yeast Saccharomyces: Gene Expression. Jones E.W., Pringle
J.R., Broach J.R. eds. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor - NYk, 1992. -P. 583-656.
9 Hong J., Tamaki H., Akiba S., Yamamoto K., Kumagai H. Cloning of a gene encoding a highly stable endo-b-1,4-ƒÀ-
glucanase from Aspergillus niger and its expression in yeast // J. Biosci. Bioeng. -2001. -V.92. -P. 434-441.
10 Miller, G.L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar//Anal. Chem.-1959. -Vol. 31.-P. 426.428.
11 Ornstein L., Davis B.J. Disc electrophoresis-I: Background and theory // Ann. NY. Acad. Sci. - 1964. - V.121. -P.321.349.
12 Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. -1970.-V. 227.-P. 680-685.
13 Kasturi L., Chen H., Shakin-Eshleman S.H. Regulation of N-linked core glycosylation: use of a site-directed
mutagenesis approach to identify Asn-Xaa-Ser/Thr sequons that are poor oligosaccharide acceptors // Biochem. J. -1997. -V. 323. -P.415-419.
14 Maley F. et al. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of
endoglycosidases // Anal. Biochem. -1989. -V. 180. -P.195-204.
15 Quay D. H. X., Bakar F. D. A., Rabu A., Said M., Illias R. M., Mahadi N. M., Hassan O., and Murad A. M. A.
Overexpression, purification and characterization of the Aspergillus niger endoglucanase, EglA, in Pichia pastoris
//African Journal of Biotechnology. - 2011. -V. 10, ‡‚ 11. - P. 2101-2111.
16 Hasper A.A., Dekkers E., van Mil M., van de Vondervoort P.J. I., de Graaff L.H. EglC, a new endoglucanase from
Aspergillus niger with major activity towards xyloglucan // Appl. Environ. Microb. -2002. -V. 68, ‡‚ 4.-P.1556-1560.
17 Hong J., Wang Y., Kumagai H., Tamaki H. Construction of thermotolerant yeast expressing thermostable cellulase
genes // J. Biotechnol. -2007. .V.130. . P.114-123.
4 Lynd L.R., van Zyl W.H., McBride J. E., Laser M. Consolidated bioprocessing of cellulosic biomass: an update //
Current Opinion in Biotechnology. -2005. -V.16, ‡‚ 5. .P. 577.583.
5 Van Rensburg R., Van Zyl W.H., Pretorius I.S. Engineering yeast for efficient cellulose degradation // Yeast. -1998.-V.14. -P.67.76.
6 Fujita Y., Ito J., Ueda M., Fukuda H., Kondo H. Synergistic saccharification, and direct fermentation to ethanol, of
amorphous cellulose by use of an engineered yeast strain codisplaying three types of cellulolytic enzymes// Appl.
Environ. Microbiol. -2004. -V.70. .P.1207.1212.
7 Voth W.P., Richards J.D., Shaw J.M., Stillman D.J. Yeast vectors for integration at the HO locus // Nucleic Acids
Res. -2001. .V.29, ‡‚12.
8 Herskowitz I., Rine J., Strathern J. Mating type determination and mating-type interconversion in Saccharomyces
cerevisiae. In: The Molecular and Cellular Biology of the Yeast Saccharomyces: Gene Expression. Jones E.W., Pringle
J.R., Broach J.R. eds. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor - NYk, 1992. -P. 583-656.
9 Hong J., Tamaki H., Akiba S., Yamamoto K., Kumagai H. Cloning of a gene encoding a highly stable endo-b-1,4-ƒÀ-
glucanase from Aspergillus niger and its expression in yeast // J. Biosci. Bioeng. -2001. -V.92. -P. 434-441.
10 Miller, G.L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar//Anal. Chem.-1959. -Vol. 31.-P. 426.428.
11 Ornstein L., Davis B.J. Disc electrophoresis-I: Background and theory // Ann. NY. Acad. Sci. - 1964. - V.121. -P.321.349.
12 Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. -1970.-V. 227.-P. 680-685.
13 Kasturi L., Chen H., Shakin-Eshleman S.H. Regulation of N-linked core glycosylation: use of a site-directed
mutagenesis approach to identify Asn-Xaa-Ser/Thr sequons that are poor oligosaccharide acceptors // Biochem. J. -1997. -V. 323. -P.415-419.
14 Maley F. et al. Characterization of glycoproteins and their associated oligosaccharides through the use of
endoglycosidases // Anal. Biochem. -1989. -V. 180. -P.195-204.
15 Quay D. H. X., Bakar F. D. A., Rabu A., Said M., Illias R. M., Mahadi N. M., Hassan O., and Murad A. M. A.
Overexpression, purification and characterization of the Aspergillus niger endoglucanase, EglA, in Pichia pastoris
//African Journal of Biotechnology. - 2011. -V. 10, ‡‚ 11. - P. 2101-2111.
16 Hasper A.A., Dekkers E., van Mil M., van de Vondervoort P.J. I., de Graaff L.H. EglC, a new endoglucanase from
Aspergillus niger with major activity towards xyloglucan // Appl. Environ. Microb. -2002. -V. 68, ‡‚ 4.-P.1556-1560.
17 Hong J., Wang Y., Kumagai H., Tamaki H. Construction of thermotolerant yeast expressing thermostable cellulase
genes // J. Biotechnol. -2007. .V.130. . P.114-123.
Жүктелулер
Как цитировать
Taipakova, S. M., Smekenov, I. T., & Bissenbaev, A. K. (2015). Создание рекомбинантного штамма Saccharomyces cerevisiae с геном эндо-β-1, 4-эндоглюконазы гриба Aspergillius niger в HO локусе хромосомы.Хромосомасының НО локусында Aspergillius niger саңырауқұлағының эндо-β-1, 4-эндоглюконаза гені бар рекомбинантты Sacc. ҚазҰУ Хабаршысы. Биология сериясы, 59(3/1), 62–69. вилучено із https://bb.kaznu.kz/index.php/biology/article/view/647
Шығарылым
Бөлім
БИОТЕХНОЛОГИЯ: ОТ ИССЛЕДОВАНИЙ К ИННОВАЦИЯМ
