Биохимическая характеристика АП-эндонуклеазы Triticum aestivum. Triticum aestivum апурин/апиримидиндік эндонуклеаза ферментінің биохимиялық қасиеттерін талдау

Анотація

С использованием tBLASTn поисковой системы базы данных NCBI по гомологии к АП-эндонуклеазе человека и арабидопсиса идентифицирован ген, кодирующий предполагаемую АП-ндонуклеазу Triticum aestivum(ТаАpe1L). Осуществлена функциональная экспрессия TaAPE1L с гистидиновым концом в E. coli и очищена. С использованием 5’-[P32] – меченных олигонуклеотидных дуплексов, содержащих единственный тетрагидро-фуран – аналог АП сайта, показано TaApe1L проявляет cлабую AП-эндонуклеазную и 3 ‘→ 5’ экзонуклеазную активность и предпочитает Mn2+в качестве кофактора. Также показано, что увеличение времени инкубации со- провождается повышением активности фермента и добавление в реакционную смесь хелатора двухвалентных ионов – ЭДТА полностью подавляет АП-эндонуклеазную активность TaApe1L. NCBI деректер базасының tBLASTn іздеу бағдарламасын пайдалана отырып адам мен арабидопсистің АП- эндонуклеазасына гомологиясы бойынша Triticum aestivum АП-эндонуклеаза ферментін (ТаАpe1L) кодтайтын ген анықталды. Бидай АП-эндонуклеаза ферментін кодтайтын кДНҚ ген КТ-ПТР көмегімен бөліп алынды. 6xHis соңды TaAPE1L E. coli жүйесінде экспрессияланып, никель-хелаттық хроматография көмегімен гомогенді күйде тазартылып алынды. АП сайттың жалғыз тетрагидрофуран аналогы бар 5’-[P32] – таңбаланған олигонуклеотидтік дуплекстерді пайдалана отырып, TaAPE1L рекомбинантты белогының АП-эндонуклеазалық белсенділігі анықталып.металлдық кофактор ретінде (Mn2+) қажет екені анықталды. Сонымен қатар, инкубация уақыты өсуімен байланысты фермент активтілігін жоғарылап, еківалентті иондар хелаторы ЭДТА ТаАpe1L белсенділігін толық тежейтіні көрсетілді