Биохимическая характеристика АП-эндонуклеазы Triticum aestivum. Triticum aestivum апурин/апиримидиндік эндонуклеаза ферментінің биохимиялық қасиеттерін талдау
109 40
Ключевые слова:
АП-эндонуклеазы, TaAPE1L, АPE1, пшеница, АП-эндонуклеаза, бидай.Аннотация
С использованием tBLASTn поисковой системы базы данных NCBI по гомологии к АП-эндонуклеазе человека и арабидопсиса идентифицирован ген, кодирующий предполагаемую АП-ндонуклеазу Triticum aestivum(ТаАpe1L). Осуществлена функциональная экспрессия TaAPE1L с гистидиновым концом в E. coli и очищена. С использованием 5’-[P32] – меченных олигонуклеотидных дуплексов, содержащих единственный тетрагидро-фуран – аналог АП сайта, показано TaApe1L проявляет cлабую AП-эндонуклеазную и 3 ‘→ 5’ экзонуклеазную активность и предпочитает Mn2+в качестве кофактора. Также показано, что увеличение времени инкубации со- провождается повышением активности фермента и добавление в реакционную смесь хелатора двухвалентных ионов – ЭДТА полностью подавляет АП-эндонуклеазную активность TaApe1L. NCBI деректер базасының tBLASTn іздеу бағдарламасын пайдалана отырып адам мен арабидопсистің АП- эндонуклеазасына гомологиясы бойынша Triticum aestivum АП-эндонуклеаза ферментін (ТаАpe1L) кодтайтын ген анықталды. Бидай АП-эндонуклеаза ферментін кодтайтын кДНҚ ген КТ-ПТР көмегімен бөліп алынды. 6xHis соңды TaAPE1L E. coli жүйесінде экспрессияланып, никель-хелаттық хроматография көмегімен гомогенді күйде тазартылып алынды. АП сайттың жалғыз тетрагидрофуран аналогы бар 5’-[P32] – таңбаланған олигонуклеотидтік дуплекстерді пайдалана отырып, TaAPE1L рекомбинантты белогының АП-эндонуклеазалық белсенділігі анықталып.металлдық кофактор ретінде (Mn2+) қажет екені анықталды. Сонымен қатар, инкубация уақыты өсуімен байланысты фермент активтілігін жоғарылап, еківалентті иондар хелаторы ЭДТА ТаАpe1L белсенділігін толық тежейтіні көрсетілдіБиблиографические ссылки
1 Джолдыбаева Б.С., Акишев Ж.Д., Сапарбаев М.К., Бисенбаев А.К. Выделение и характеристика кДНК гена апурин/апиримидиновой эндонуклеазы Triticum aestivum// Вестник КазНУ, серия биологическая. – 2013. – С. 268-271.
2 Saparbaev M., Laval J. 3,N4-ethenocytosine, a highly mutagenic adduct, is a primary substrate for E. coli double-stranded uracil-DNA glycosylase and human mismatch-specific thymine-DNA glycosylase // Proc. Natl. Acad. Sci. – 1998. – Vol. 95. – P. 8508-8513.
3 Ischenko A.A., Saparbaev M.K. Alternative nucleotide incision repair pathway for oxidative DNA damage // Nature. – 2002. –Vol. 415. – Р. 183-187.
4 Cordoba-Canero D., Roldan-Arjona T., Ariza R. Arabidopsis ARP endonuclease functions in a branched base excision DNA repair pathway completed by LIG1 // Plant J. – 2011. – №68. – P.693-702
5 Zharkov D.O. Base excision DNA repair // Cell Mol .Life Sci. – 2008. – №65. -P.1544-1565
6 Sancar A., Lindsey-Boltz L., Unsal-Kacmaz K., Linn S. Molecular mechanisms of mammalian DNA repair and the DNA damage checkpoints // Annu. Rev. Biochem. – 2004. – №73. – P.39-85.
2 Saparbaev M., Laval J. 3,N4-ethenocytosine, a highly mutagenic adduct, is a primary substrate for E. coli double-stranded uracil-DNA glycosylase and human mismatch-specific thymine-DNA glycosylase // Proc. Natl. Acad. Sci. – 1998. – Vol. 95. – P. 8508-8513.
3 Ischenko A.A., Saparbaev M.K. Alternative nucleotide incision repair pathway for oxidative DNA damage // Nature. – 2002. –Vol. 415. – Р. 183-187.
4 Cordoba-Canero D., Roldan-Arjona T., Ariza R. Arabidopsis ARP endonuclease functions in a branched base excision DNA repair pathway completed by LIG1 // Plant J. – 2011. – №68. – P.693-702
5 Zharkov D.O. Base excision DNA repair // Cell Mol .Life Sci. – 2008. – №65. -P.1544-1565
6 Sancar A., Lindsey-Boltz L., Unsal-Kacmaz K., Linn S. Molecular mechanisms of mammalian DNA repair and the DNA damage checkpoints // Annu. Rev. Biochem. – 2004. – №73. – P.39-85.
Загрузки
Как цитировать
Bissenbaev, A. K., Zholdybaeva, B. S., Tusumkhanova, Z. T., Akishev, Z. D., & Saparbaev, M. K. (2015). Биохимическая характеристика АП-эндонуклеазы Triticum aestivum. Triticum aestivum апурин/апиримидиндік эндонуклеаза ферментінің биохимиялық қасиеттерін талдау. Вестник КазНУ. Серия биологическая, 60(1), 27–30. извлечено от https://bb.kaznu.kz/index.php/biology/article/view/49
Выпуск
Раздел
Биоинформатика, геномика и протеомика. Физико-химическая биология
