Клонирование, экспрессия гена AtUbp1b и очистка кодируемого им белка. AtUbp1b генін клондау, экспрессиялау жəне ол кодтайтын белокты тазалау
67 56
Keywords:
стрессовые гранулы, TIAR, AtUBP1b, аффинная хроматография. жағымсыз жағдай гранулалары, аффинды хроматография.Abstract
В клетках эукариотических организмов в ответ на стресс образуются гранулы матричных рибонуклеопротеидов, так называемые стрессовые гранулы. Эти гранулы образуются в результате таких стрессовых воздействий, как тепловой и окислительный шок, облучение ультрафиолетом, голодание по аминокислотам и нуклеотидам. Одним из видов реакций клетки на стресс является фосфорилирование альфа-субъединицы фактора инициации трансляции 2 (eIF2) и последующее блокирование трансляции. Образование стрессовых гранул происходит с участием РНК-связывающих белков, среди которых идентифицированы белки TIA-1 и TIAR. Эти белки выступают в роли общих трансляционных репрессоров в клетках, подверженных стрессу. Аналогом этих белков в растительных клетках является белок AtUBP1, идентифицированный в Arabidopsis thaliana. В данной работе нами впервые был экспрессирован белок AtUBP1b в клетках E.coli. Этот белок был очищен с помощью аффинной хроматографии и последующего осаждения сульфатом аммония. Эукариоттық ағзалардың жасушаларында жағымсыз жағдайға жауап ретінде матрицалық рибонуклеопротеид гранулалары (жағымсыз жағдай гранулалары деп аталатын) пайда болады. Бұл гранулалар ыстық жəне тотықтандыру шогы, ультрафиолетпен сəулелендіру, амин қышқылдары мен нуклеотидтер жетіспеуі əсерінен пайда болады. Жағымсыз жағдайға жауаптың біреуі – трансляция инициациясы факторы 2 (eIF2) фосфорильденуі мен кейін трансляцияның тежелуі. Жағымсыз жағдай гранулалары пайда болуы РНҚмен байланысатын белоктар қатысуымен өтеді. Олардың ішінде TIA-1 и TIAR белоктары бар екені анықталды. Бұл белоктар жағымсыз жағдайға душар болған жасушаларда трансляцияның жалпы репрессорлары ретінде əрекет етеді. Өсімдік жасушаларында осы белоктардың іспеттесі болып Arabidopsis thaliana-да табылған AtUBP1 белогы. Осы жұмыста біз бірінші болып AtUBP1 белогын E.coli жасушаларында экспрессияладық. Ол белок аффинды хроматография көмегімен жəне кейін аммоний сульфатымен тұнбаланып тазаланды.References
1 Kedersha N, Cho M.R., Li W., Yacono P.W., Chen S., Gilks N., Golan D.E., Anderson P. Dynamic shuttling of
TIA-1 accompanies the recruitment of mRNA to mammalian stress granules // J Cell Biol. – 2000. – Vol. 151. – P.1257-1268.
2 Damgaard C.K., Lykke-Andersen J. Translational coregulation of 5’TOP mRNAs by TIA-1 and TIAR // Genes Dev. – 2011. – Vol. 25. – P. 2057-2068.
3 Weber C., Nover L., Fauth M. Plant stress granules and mRNA processing bodies are distinct from heat stress
granules // The Plant Journal. – 2008. – Vol. 56. – P. 517-530.
4 Ivanov P., Kedersha N., Anderson P. Stress puts TIA on TOP // GENES & DEVELOPMENT. – 2011. – Vol. 25.– P. 2119-2124.
5 Iadevaia V, Caldarola S, Tino E, Amaldi F, Loreni F.. All translation elongation factors and the e, f, and h
subunits of translation initiation factor 3 are encoded by 5’-terminal oligopyrimidine (TOP) mRNAs // RNA. – 2008. –
Vol. 14. – P. 1730-1736.
6 Lorkovic, Z.J., Barta, A. Genome analysis: RNA recognition motif (RRM) and K homology (KH) domain RNAbinding
proteins from the flowering plant Arabidopsis thaliana // Nucleic Acids Res. – 2002. – Vol. 30. – P. 623-635.
7 Vorackova I., Suchanova S., Ulbrich P., Diehl W.E., Ruml T. Purification of proteins containing zinc finger
domains using immobilized metal ion affinity chromatography // Protein Expression and Purification. – 2011. – Vol. 79.– P. 88-95.
8 Wingfield P.T. Preparation of soluble proteins from Escherichia coli // In: Current protocols in protein science. –
1995. – Vol. 1, New York: Wiley and Sons. – P. 6.2.1-6.2.15.
Schägger H. Tricine-SDS-PAGE // National Protocols. – 2006. – Vol. 1. – P. 16-22.
TIA-1 accompanies the recruitment of mRNA to mammalian stress granules // J Cell Biol. – 2000. – Vol. 151. – P.1257-1268.
2 Damgaard C.K., Lykke-Andersen J. Translational coregulation of 5’TOP mRNAs by TIA-1 and TIAR // Genes Dev. – 2011. – Vol. 25. – P. 2057-2068.
3 Weber C., Nover L., Fauth M. Plant stress granules and mRNA processing bodies are distinct from heat stress
granules // The Plant Journal. – 2008. – Vol. 56. – P. 517-530.
4 Ivanov P., Kedersha N., Anderson P. Stress puts TIA on TOP // GENES & DEVELOPMENT. – 2011. – Vol. 25.– P. 2119-2124.
5 Iadevaia V, Caldarola S, Tino E, Amaldi F, Loreni F.. All translation elongation factors and the e, f, and h
subunits of translation initiation factor 3 are encoded by 5’-terminal oligopyrimidine (TOP) mRNAs // RNA. – 2008. –
Vol. 14. – P. 1730-1736.
6 Lorkovic, Z.J., Barta, A. Genome analysis: RNA recognition motif (RRM) and K homology (KH) domain RNAbinding
proteins from the flowering plant Arabidopsis thaliana // Nucleic Acids Res. – 2002. – Vol. 30. – P. 623-635.
7 Vorackova I., Suchanova S., Ulbrich P., Diehl W.E., Ruml T. Purification of proteins containing zinc finger
domains using immobilized metal ion affinity chromatography // Protein Expression and Purification. – 2011. – Vol. 79.– P. 88-95.
8 Wingfield P.T. Preparation of soluble proteins from Escherichia coli // In: Current protocols in protein science. –
1995. – Vol. 1, New York: Wiley and Sons. – P. 6.2.1-6.2.15.
Schägger H. Tricine-SDS-PAGE // National Protocols. – 2006. – Vol. 1. – P. 16-22.
Downloads
How to Cite
Smagulova, A., Nizkorodova, A., Poliyanskaya, E., Kryldakov, R., & Iskakov, B. (2015). Клонирование, экспрессия гена AtUbp1b и очистка кодируемого им белка. AtUbp1b генін клондау, экспрессиялау жəне ол кодтайтын белокты тазалау. Experimental Biology, 59(3/1), 175–178. Retrieved from https://bb.kaznu.kz/index.php/biology/article/view/680
Issue
Section
Biotechnology: from research to innovations
