Клонирование открытых рамок считывания М-вируса картофеля, кодирующих супрессоры РНК-интерференции. РНҚ-интерференцияның тежегіш-белоктарын кодтайтын картоп М вирусының ашық оқылатын рамкаларын клондау.
Ключевые слова:
М-вирус картофеля (PVM), РНК-интерференция (RNAi), PVM белки – супрессоры RNAi, картоп М вирусы (PVM), РНҚ-интерференция (RNAi), тежегіш PVM белоктары,Аннотация
ДНК двух открытых рамок считывания (ОРС3 и ОРС5) вируса картофеля М (PVM) были клонированы в Gateway-совместимый экспрессионный вектор pMDC32 под контролем двойного 35S промотора. Каждая из этих конструкций была введена путем электропорации в клетки Agrobacterium tumefaciens. Затем эти клетки были инфильтрованы в растения Nicotiana benthamiana линии 16C, которые тестировались на проявление активности, супрессирующей РНК-интерференцию. Далее последовательности ОРС3 и ОРС5 были клонированы в прямой и обратной ориентации, для создания трансгенных растений, устойчивых к PVM. Картоп М вирусының М (PVM) ашық оқылатын екі рамкаларының (ОРС3 және ОРС5) ДНҚ-дары Gateway- мен үйлесімді қосқабат 35S промоторының бақылауындағы экспрессиялайтын pMDC32 векторына клондалды. Олардың екеуі де РНК-интерференцияның тежегіш әрекеттілігі пайда болуына тексерілген Agrobacterium benthamiana-ның 16C линиясы жасушаларына электротесу әдісімен енгізілді. Осыдан кейін ОРС3 және ОРС5 тізбектері PVM-ға төзімді трансгендік өсімдіктер шығару үшін түзу және теріс бағытта клондалды.Библиографические ссылки
1 Baulcombe D. RNA silencing in plants // Nature. - 2004. -V. 431.-P. 356-363.
2 Voinnet O. Post-transcriptional RNA silencing in plant-microbe interactions: a touch of robustness and versatility //Curr.Opin. Plant Biol.- 2008.- V.11. - №4. - P.464-470.
3 Ruiz-Ferrer V., Voinnet O. Roles of plant small RNAs in biotic stress responses // Annual Review of Plant Biology.
– 2009. – V. 60. – P. 485-510.
4 Alvarado V., Scholthof H.B. Plant responses against invasive nucleic acids: RNA silencing and its suppression by
plant viral pathogens // Semin.Cell. Dev. Biol. – 2009. – V.20. - №9. – P.1032-1040.
5 Омаров Р.Т., Берсимбай Р.И. Биохимические механизмы супрессии РНК-интерференции вирусами растений // Биохимия. – 2010. – Т. 75. – Вып. 8. – С. 1062-1069.
6 Kryldakov R., Akbergenov R., Hohn T., Iskakov B. Identification of silencing suppressors of potato virus M // Journal of Cell and Molecular Biology . – 2011. – V.9. - №1. – P.15-20.
7 Zavriev S.K., Kanyuka K.V., Levay K.E. The genome organization of potato virus M RNA // J. Gen. Virol. – 1991.
– V. 72. – P. 9–14.
8 Proll E., Leiser R.M., Ostermann W.D., Spaar D. Some physicochemical properties of potato virus M // Potato Res.
– 1981. – V. 24. – P. 1–10.
9 Flatken S., Ungewickell V., Menzel W., Maiss E. Construction of an infectious full-length cDNA clone of potato virus M // Arch. Virol. – 2008. – V. 153. – P. 1385–1389.
10 Tavantzis S.M. Physicochemical properties of potato virus M // Virology. – 1984. – V. 133. – P. 427-430.
11 Sozinova L., Abay A., Ramankulov E., Nachmias A., Loebenstein G. Reducing Virus Incidence in Potato Seed Tubers by Rapid Propagation: A Pilot Scheme in Kazakhstan // Phytoparasitica. – 2007. – V.35. - № 2. – P.201.
12 Curtis M.D., Grossniklaus U. A Gateway Cloning Vector Set for High-Throughput Functional Analysis of Genes in
Planta // Plant Physiology. – 2003. – V.133. – P.462-469.
13 Voinnet O., Pinto Y.M., Baulcombe D.C. Suppression of gene silencing: A general strategy used by diverse DNA
and RNA viruses of plants // PNAS. – 1999. – V.96. - № 24. – P. 14147-14152.
14 Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory manual - 1ed.-New York: Cold Spring Harbor
Lab. Press, 1989. - 3 vols.
2 Voinnet O. Post-transcriptional RNA silencing in plant-microbe interactions: a touch of robustness and versatility //Curr.Opin. Plant Biol.- 2008.- V.11. - №4. - P.464-470.
3 Ruiz-Ferrer V., Voinnet O. Roles of plant small RNAs in biotic stress responses // Annual Review of Plant Biology.
– 2009. – V. 60. – P. 485-510.
4 Alvarado V., Scholthof H.B. Plant responses against invasive nucleic acids: RNA silencing and its suppression by
plant viral pathogens // Semin.Cell. Dev. Biol. – 2009. – V.20. - №9. – P.1032-1040.
5 Омаров Р.Т., Берсимбай Р.И. Биохимические механизмы супрессии РНК-интерференции вирусами растений // Биохимия. – 2010. – Т. 75. – Вып. 8. – С. 1062-1069.
6 Kryldakov R., Akbergenov R., Hohn T., Iskakov B. Identification of silencing suppressors of potato virus M // Journal of Cell and Molecular Biology . – 2011. – V.9. - №1. – P.15-20.
7 Zavriev S.K., Kanyuka K.V., Levay K.E. The genome organization of potato virus M RNA // J. Gen. Virol. – 1991.
– V. 72. – P. 9–14.
8 Proll E., Leiser R.M., Ostermann W.D., Spaar D. Some physicochemical properties of potato virus M // Potato Res.
– 1981. – V. 24. – P. 1–10.
9 Flatken S., Ungewickell V., Menzel W., Maiss E. Construction of an infectious full-length cDNA clone of potato virus M // Arch. Virol. – 2008. – V. 153. – P. 1385–1389.
10 Tavantzis S.M. Physicochemical properties of potato virus M // Virology. – 1984. – V. 133. – P. 427-430.
11 Sozinova L., Abay A., Ramankulov E., Nachmias A., Loebenstein G. Reducing Virus Incidence in Potato Seed Tubers by Rapid Propagation: A Pilot Scheme in Kazakhstan // Phytoparasitica. – 2007. – V.35. - № 2. – P.201.
12 Curtis M.D., Grossniklaus U. A Gateway Cloning Vector Set for High-Throughput Functional Analysis of Genes in
Planta // Plant Physiology. – 2003. – V.133. – P.462-469.
13 Voinnet O., Pinto Y.M., Baulcombe D.C. Suppression of gene silencing: A general strategy used by diverse DNA
and RNA viruses of plants // PNAS. – 1999. – V.96. - № 24. – P. 14147-14152.
14 Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory manual - 1ed.-New York: Cold Spring Harbor
Lab. Press, 1989. - 3 vols.
Загрузки
Выпуск
Раздел
БИОТЕХНОЛОГИЯ
