Синтез белка оболочки L1RΔ вируса оспы овец в растениях. Өсімдіктерде қой шешегі вирусы қабықшасының L1RΔ ақуызының синтезі
50 36
Ключевые слова:
вирус оспы овец, трансгенные растения, қой шешегі вирусы, трансгенді өсімдік,Аннотация
Ген SPPV-NISKHI-56 вируса оспы овец кодирует ортолог иммунодоминантного белка L1R вируса повакцины. Последовательность гена, кодирующая гидрофильную часть белка (L1RΔ) была искусственно синтезирована и клонирована в плазмиду pET-19b для экспрессии в бактериях. Для трансформации растений табака (Nicotiana tabacum L. cv. Samsun-NN) была получена рекомбинантная ДНК-конструкция на основе вектора pCAMBIA2300, содержащая 35S промотор вируса мозаики цветной капусты (CaMV), 5'НТП гРНК AMV, His-Tag, ген белка L1RΔ и терминатор транскрипции гена нопалин синтазы (NOS-ter). Трансформированные растения - регенеранты, образовавшие корни на среде с канамицином, были проверены с помощью реакции обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) на наличие соответствующей мРНК. Рекомбинантный белок удалось детектировать в нескольких трансгенных растениях с помощью специфических антител к белку L1RΔ. Қой шешегі вирусының SPPV-NISKHI-56 гені адам шешегі вирусының L1R иммундық доминантты ақуыз ортологын кодтайды. Ақуыздың гидрофилді бөлігін (L1RΔ) кодтайтын геннің тізбегі жасанды синтезделіп, бактерияларда экспрессиясы үшін pET-19b плазмидаға клондалған. Темекі өсімдігінің (Nicotiana tabacum L. Cv. Samsun-NN) трансформациясы үшін 35S промотор CaMV, 5’AMV, His-Tag, L1RΔ ақуызының гені және транскрипцияның терминаторынан (NOS-ter) құралатын pCAMBIA2300 векторы негізінде рекомбинатты ДНҚ-құрылымы алынды. Транформацияланған өсімдік канамицин бар ортада түзілген тамырларының регенеранты, олар сәйкес мРНҚ-ның болуына қатысты кері транскрипция (КТ-ПТР) реакциясы көмегімен тексерілді. Рекомбинантты ақуызды L1RΔ ақуызына арнайы антиденелер көмегімен бірқатар трансгенді өсімдіктерде анықталды.Библиографические ссылки
1 Tulman E.R., Alfonso C.L., Lu Z., Zsak L., Sur J.-H., Sandybaev N.T., Kerembekova U.Z., Zaitsev V.L., Kutish G.F., Rock D.L. The Genomes of Sheeppox and Goatpox Viruses // Journal of Virology. – 2002. - 76(12), - 6054-6061.
2 Орлова Е.С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз. – Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. – Владимир, 2007. – 6 с.
3 Giddings G. Transgenic plants as protein factories // Current Opinion in Biotechnology. – 2001. - 12, - 450–454.
4 Daniell H., Streatfield S., Wycoff K. Medical molecular farming: production of antibodies, biopharmaceuticals and edible vaccines in plants // Trends in Plant Sci. – 2001. – V. 6. – P. 219-226.
5 Hooper J.W., Custer D.M., Schmaljohn C.S., Schmaljohn A.L. DNA vaccination with vaccinia virus L1R and A33R genes protects mice against a lethal poxvirus challenge // Virology. – 2000. – V. 266. – P. 329–339.
6 Sambrook J., Russell D.W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. - 3rd ed. - CSHL Press: New York, USA, 2001. - pp. A8.40-A8.45, A8.52-A8.55.
7 Shen W.J., Forde B.G. Efficient transformation of agrobacterium spp by high-voltage electroporation // Nucleic Acids Research. – 1989. – V. 17. – P. 8385.
8 Horsch R.B., Rogers S.G., Fraley R.T. Transgenic plants // Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology.– 1985. – V. 50. – P. 433-437.
9 Dilworth E., Frey J.E. A rapid method for high throughput DNA extraction from plant material for PCR amplification // Plant Molecular Biology Reporter. – 2000. – V. 18(1). – P. 61-64.
10 Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Analytical Biochemistry. – 1976. – V. 72. – P. 248-254.
2 Орлова Е.С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз. – Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук. – Владимир, 2007. – 6 с.
3 Giddings G. Transgenic plants as protein factories // Current Opinion in Biotechnology. – 2001. - 12, - 450–454.
4 Daniell H., Streatfield S., Wycoff K. Medical molecular farming: production of antibodies, biopharmaceuticals and edible vaccines in plants // Trends in Plant Sci. – 2001. – V. 6. – P. 219-226.
5 Hooper J.W., Custer D.M., Schmaljohn C.S., Schmaljohn A.L. DNA vaccination with vaccinia virus L1R and A33R genes protects mice against a lethal poxvirus challenge // Virology. – 2000. – V. 266. – P. 329–339.
6 Sambrook J., Russell D.W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. - 3rd ed. - CSHL Press: New York, USA, 2001. - pp. A8.40-A8.45, A8.52-A8.55.
7 Shen W.J., Forde B.G. Efficient transformation of agrobacterium spp by high-voltage electroporation // Nucleic Acids Research. – 1989. – V. 17. – P. 8385.
8 Horsch R.B., Rogers S.G., Fraley R.T. Transgenic plants // Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology.– 1985. – V. 50. – P. 433-437.
9 Dilworth E., Frey J.E. A rapid method for high throughput DNA extraction from plant material for PCR amplification // Plant Molecular Biology Reporter. – 2000. – V. 18(1). – P. 61-64.
10 Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Analytical Biochemistry. – 1976. – V. 72. – P. 248-254.
Загрузки
Как цитировать
Beisenov, D., Stanbekova, G., Nadirova, L., & Iskakov, B. (2015). Синтез белка оболочки L1RΔ вируса оспы овец в растениях. Өсімдіктерде қой шешегі вирусы қабықшасының L1RΔ ақуызының синтезі. Вестник КазНУ. Серия биологическая, 60(2), 187–190. извлечено от https://bb.kaznu.kz/index.php/biology/article/view/157
Выпуск
Раздел
БИОТЕХНОЛОГИЯ
