Клонирование, экспрессия гена AtUbp1b и очистка кодируемого им белка. AtUbp1b генін клондау, экспрессиялау жəне ол кодтайтын белокты тазалау

Аннотация

В клетках эукариотических организмов в ответ на стресс образуются гранулы матричных рибонуклеопротеидов, так называемые стрессовые гранулы. Эти гранулы образуются в результате таких стрессовых воздействий, как тепловой и окислительный шок, облучение ультрафиолетом, голодание по аминокислотам и нуклеотидам. Одним из видов реакций клетки на стресс является фосфорилирование альфа-субъединицы фактора инициации трансляции 2 (eIF2) и последующее блокирование трансляции. Образование стрессовых гранул происходит с участием РНК-связывающих белков, среди которых идентифицированы белки TIA-1 и TIAR. Эти белки выступают в роли общих трансляционных репрессоров в клетках, подверженных стрессу. Аналогом этих белков в растительных клетках является белок AtUBP1, идентифицированный в Arabidopsis thaliana. В данной работе нами впервые был экспрессирован белок AtUBP1b в клетках E.coli. Этот белок был очищен с помощью аффинной хроматографии и последующего осаждения сульфатом аммония. Эукариоттық ағзалардың жасушаларында жағымсыз жағдайға жауап ретінде матрицалық рибонуклеопротеид гранулалары (жағымсыз жағдай гранулалары деп аталатын) пайда болады. Бұл гранулалар ыстық жəне тотықтандыру шогы, ультрафиолетпен сəулелендіру, амин қышқылдары мен нуклеотидтер жетіспеуі əсерінен пайда болады. Жағымсыз жағдайға жауаптың біреуі – трансляция инициациясы факторы 2 (eIF2) фосфорильденуі мен кейін трансляцияның тежелуі. Жағымсыз жағдай гранулалары пайда болуы РНҚмен байланысатын белоктар қатысуымен өтеді. Олардың ішінде TIA-1 и TIAR белоктары бар екені анықталды. Бұл белоктар жағымсыз жағдайға душар болған жасушаларда трансляцияның жалпы репрессорлары ретінде əрекет етеді. Өсімдік жасушаларында осы белоктардың іспеттесі болып Arabidopsis thaliana-да табылған AtUBP1 белогы. Осы жұмыста біз бірінші болып AtUBP1 белогын E.coli жасушаларында экспрессияладық. Ол белок аффинды хроматография көмегімен жəне кейін аммоний сульфатымен тұнбаланып тазаланды.