Клонирование кДНК-фрагментов геномной рнк М-вируса картофеля, кодирующих потенциальные супрессоры РНК-интерференции. РНҚ-интерференцияның ықтимал басқыштарын кодтайтын картоп М-вирусының геномдық РНҚ-ның кДНҚ-бөліктерін клондау
Ключевые слова:
М-вирус картофеля (PVM), РНК-интерференция (RNAi, клонирование ОРС гРНК PVM, PVM белкисупрессоры RNAi.картоптың М-вирусы (PVM), РНК-интерференция (RNAi), PVM гРНҚ АОБ клондау, PVM RNAi басқыш белоктары.Аннотация
В настоящей работе амплифицированы 3'-проксимальные открытые рамки считывания (ОРС25К, ОРС12К,ОРС7К, ОРС34К и ОРС11К) геномной (г)РНК М-вируса картофеля (PVM). Проведено клонирование амплифицированных фрагментов с использованием Gateway-технологии сначала в бактериальном (pDONR207),а затем в растительном (pMDC32) векторе под контролем двойного 35S промотора. Этот этап работы посвящён амплификации целевых фрагментов гРНК PVM и их клонированию для последующей трансформации агробактерий и ко-инфильтрации растений, с целью идентификации вирусных белков – супрессоров RNAi. Осы жұмыста кері транскрипция (КТ) жəне полимераздық тізбекті əрекеті(ПТƏ) көмегімен 3'-ұшына жақын ашық оқылатын PVM геномдық (г)РНҚ бөліктері (ОРС25К, ОРС12К, ОРС7К, ОРС34К и ОРС11К) көбейтілді.Gateway-технологияны пайдаланып көбейтілген бөліктер қосарланған 35S промоторы бақылауымен бастапқыда бактерия (pDONR207), одан кейін өсімдік векторында (pMDC32) клондалды. Жұмыстың бұл кезеңі кейін вирус белоктары арасында ықтимал RNAi супрессорларын айқындау мақсатымен өсімдіктерді агробактериялармен трансформациялауға жəне соинфильтрациялауға арналған.Библиографические ссылки
1 Baulcombe D. RNA silencing in plants // Nature. - 2004. - V. 431. - P. 356-363.
2 Voinnet O. Post-transcriptional RNA silencing in plant-microbe interactions: a touch of robustness and versatility //
Curr. Opin. Plant Biol. - 2008. - V.11. - №4. - P.464-470.
3 Ruiz-Ferrer V., Voinnet O. Roles of plant small RNAs in biotic stress responses // Annual Review of Plant Biology.
- 2009. - V. 60. - P. 485-510.
4 Alvarado V., Scholthof H.B. Plant responses against invasive nucleic acids: RNA silencing and its suppression by
plant viral pathogens // Semin.Cell. Dev. Biol. - 2009. - V.20. - №.9. - P.1032-1040.
5 Омаров Р.Т., Берсимбай Р.И. Биохимические механизмы супрессии РНК-интерференции вирусами растений
// Биохимия. - 2010. - Т. 75, Вып. 8. - С. 1062-1069.
6 Zavriev S.K., Kanyuka K.V., Levay K.E. The genome organization of potato virus M RNA // J. Gen. Virol. - 1991. -V. 72. - P. 9–14.
7 Proll E., Leiser R.M., Ostermann W.D., Spaar D. Some physicochemical properties of potato virus M // Potato Res.
- 1981. - V. 24. - P. 1–10.
8 Flatken S., Ungewickell V., Menzel W., Maiss E. Construction of an infectious full-length cDNA clone of potato
virus M // Arch. Virol. - 2008. - V. 153. - P. 1385–1389.
9 Tavantzis S.M. Physicochemical properties of potato virus M // Virology. - 1984. - V. 133. - P. 427-430.
10 Hartley J.L., Temple G.F., Brasch M.A. DNA cloning using in vitro site-specific recombination // Genome Res. -
2000. - V.10. - P. 1788-1795.
11 Katzen F. Gateway recombinational cloning: a biological operating system // Expert Opin. Drug Discov. - 2007. - V.2(4). - P. 571-589.
12 Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning . A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989. - 3 vol. – 245 р.
2 Voinnet O. Post-transcriptional RNA silencing in plant-microbe interactions: a touch of robustness and versatility //
Curr. Opin. Plant Biol. - 2008. - V.11. - №4. - P.464-470.
3 Ruiz-Ferrer V., Voinnet O. Roles of plant small RNAs in biotic stress responses // Annual Review of Plant Biology.
- 2009. - V. 60. - P. 485-510.
4 Alvarado V., Scholthof H.B. Plant responses against invasive nucleic acids: RNA silencing and its suppression by
plant viral pathogens // Semin.Cell. Dev. Biol. - 2009. - V.20. - №.9. - P.1032-1040.
5 Омаров Р.Т., Берсимбай Р.И. Биохимические механизмы супрессии РНК-интерференции вирусами растений
// Биохимия. - 2010. - Т. 75, Вып. 8. - С. 1062-1069.
6 Zavriev S.K., Kanyuka K.V., Levay K.E. The genome organization of potato virus M RNA // J. Gen. Virol. - 1991. -V. 72. - P. 9–14.
7 Proll E., Leiser R.M., Ostermann W.D., Spaar D. Some physicochemical properties of potato virus M // Potato Res.
- 1981. - V. 24. - P. 1–10.
8 Flatken S., Ungewickell V., Menzel W., Maiss E. Construction of an infectious full-length cDNA clone of potato
virus M // Arch. Virol. - 2008. - V. 153. - P. 1385–1389.
9 Tavantzis S.M. Physicochemical properties of potato virus M // Virology. - 1984. - V. 133. - P. 427-430.
10 Hartley J.L., Temple G.F., Brasch M.A. DNA cloning using in vitro site-specific recombination // Genome Res. -
2000. - V.10. - P. 1788-1795.
11 Katzen F. Gateway recombinational cloning: a biological operating system // Expert Opin. Drug Discov. - 2007. - V.2(4). - P. 571-589.
12 Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning . A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989. - 3 vol. – 245 р.
Загрузки
Выпуск
Раздел
БИОТЕХНОЛОГИЯ: ОТ ИССЛЕДОВАНИЙ К ИННОВАЦИЯМ
