КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ кДНК ЭНДО-Β-1,4-ГЛЮКАНАЗЫ ГРИБА ASPERGILLUS NIGER В E. coli И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА

Аннотация

Эндо-β-1,4-глюканаза (EG) является одним из ключевых ферментов целлюлазного комплекса, ответственного за гидролиз аморфных волокон целлюлозы. кДНК EG из гриба Aspergillus niger был клонирован в клетках Е. coli. Методика клонирования включала получение и амплификацию кДНК гена с помощью ПЦР со cпецифическими праймерами. Продукт ПЦР был клонирован в векторной плазмиде Е. coli под контролем промотора фага Т7. Показана экспрессия гена eng1 в клетках рекомбинантного штамма E. coli. Исследованы некоторые физико-химические свойства EG. Рекомбинантный белок обладал максимальной активностью при 500С и рН 6.0. Эндо-β-1,4-глюканаза EGаморфты целлюлозаның гидролизіне жауапты целлюлазалық кешен ферменттерінің маңызды құрамдас бөлігі болып табылады. Aspergillus niger саңырауқұлағының EG кДНҚ молекуласы Е. coli клеткасында клондалды. Клондау əдісі сайт спецификалық праймерлерді қолдану арқылы ПТР əдісі көмегімен кДНК молекуласын амплификациялау арқылы жүзеге асырылды. ПТР өнімі Т7 фагы промоторы бақылауында pET11d векторында клондалды. E. Coli клеткасының рекомбинантты штаммында eng1 генінің экспрессиясы көрсетілді. ENG1-ның кейбір физико-химиялық қасиеттері зерттелді. Рекомбинантты белок 500 С жəне рН6.0 максималды белсенділік көрсететіні анықталды.