КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ кДНК ЭНДО-Β-1,4-ГЛЮКОНАЗЫ ГРИБА ASPERGILLUS NIGER В E.COLI
Ключевые слова:
vector pET11d, EG enzymes,Аннотация
Проведена амплификация кДНК эндоглюконазы гриба Aspergillus niger IFO31125 помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Ген клонирован под контролем регулируемого промотора фага Т7 векора pET11d и трансформирован в компетентных клетках E.coli Rosetta (DE3). Экспрессия гена eng1 был показан с помощью ДСН-ПААГ электрофореза и определения ферментативной активности. Рекомбинантный фермент проявляет оптимальную активность при рН 6. Оптимальная температура фермента 50 оС. EG аморфты целлюлозаның гидролизіне жауапты целлюлазалық кешен ферменттерінің маңызды құрамдас бөлігі болып табылады. Aspergillus niger IFO31125 саңырауқұлағының eng1 кДНҚ молекуласы Е. coli клеткасында клондалды. Клондау əдісі сайт спецификалық праймерлерді қолдану арқылы ПТР əдісі көмегімен кДНК молекуласын амплификациялау арқылы жүзеге асырылды. ПТР өнімі Т7 фагы промоторы бақылауында pET11d векторында клондалды жəне E. Coli клеткасының рекомбинантты штаммында eng1 генінің экспрессиясы көрсетілді.Библиографические ссылки
1 Murai T., Ueda M., Kawaguchi T., Arai M., Tanaka A. Assimilation of cellooligosaccharides by a cell surface-engineered yeast expressing beta -glucosidase and carboxymethylcellulase from Aspergillus aculeatus // Appl
Environ Microbiol, 1998. – Vol.64. – P. 4857-4861.
2 Hong J., Tamaki H., Akiba S., Yamamoto K., Kumaga H. Cloning of a gene encoding a highly stable endo-β- 1,4-glucanase from Aspergillus niger and Its expression in Yeast // J. Biosci. Bioeng, 2001. – Vol. 92(5). – P. 434-441.
3 Teeri T.T. Crystalline cellulose degradation: new insight into the function of cellobiohydrolases // Trends in Biotechnology, 1997. – Vol. 15. – P. 160-167.
4. Синицын А.П., Гусаков А.В., Черноглазов В.М. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов: Учебное пособие. - М.: Изд-во МГУ, 1995.
Environ Microbiol, 1998. – Vol.64. – P. 4857-4861.
2 Hong J., Tamaki H., Akiba S., Yamamoto K., Kumaga H. Cloning of a gene encoding a highly stable endo-β- 1,4-glucanase from Aspergillus niger and Its expression in Yeast // J. Biosci. Bioeng, 2001. – Vol. 92(5). – P. 434-441.
3 Teeri T.T. Crystalline cellulose degradation: new insight into the function of cellobiohydrolases // Trends in Biotechnology, 1997. – Vol. 15. – P. 160-167.
4. Синицын А.П., Гусаков А.В., Черноглазов В.М. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов: Учебное пособие. - М.: Изд-во МГУ, 1995.
Загрузки
Выпуск
Раздел
БИОЛОГИЯ
