КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ кДНК ЭНДО-Β-1,4-ГЛЮКАНАЗЫ ГРИБА ASPERGILLUS NIGER В E. coli И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА
Ключевые слова:
глюканаза, фермент, гидролиз, целлюлоза, Рекомбинантты белок,Аннотация
Эндо-β-1,4-глюканаза (EG) является одним из ключевых ферментов целлюлазного комплекса, ответственного за гидролиз аморфных волокон целлюлозы. кДНК EG из гриба Aspergillus niger был клонирован в клетках Е. coli. Методика клонирования включала получение и амплификацию кДНК гена с помощью ПЦР со cпецифическими праймерами. Продукт ПЦР был клонирован в векторной плазмиде Е. coli под контролем промотора фага Т7. Показана экспрессия гена eng1 в клетках рекомбинантного штамма E. coli. Исследованы некоторые физико-химические свойства EG. Рекомбинантный белок обладал максимальной активностью при 500С и рН 6.0. Эндо-β-1,4-глюканаза EGаморфты целлюлозаның гидролизіне жауапты целлюлазалық кешен ферменттерінің маңызды құрамдас бөлігі болып табылады. Aspergillus niger саңырауқұлағының EG кДНҚ молекуласы Е. coli клеткасында клондалды. Клондау əдісі сайт спецификалық праймерлерді қолдану арқылы ПТР əдісі көмегімен кДНК молекуласын амплификациялау арқылы жүзеге асырылды. ПТР өнімі Т7 фагы промоторы бақылауында pET11d векторында клондалды. E. Coli клеткасының рекомбинантты штаммында eng1 генінің экспрессиясы көрсетілді. ENG1-ның кейбір физико-химиялық қасиеттері зерттелді. Рекомбинантты белок 500 С жəне рН6.0 максималды белсенділік көрсететіні анықталды.Библиографические ссылки
1.Синицын А.П., Гусаков А.В., Черноглазое В.М. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов.МГУ, 1995.
2.Эрнст Л., Лаптев Г. Ферменты улучшают переваривание клетчатки // Животноводство России.-2006. -№10. -С. 36-38.
3.Miyamoto K. Renewable biological systems for alternative sustainable energy production // Food &Agriculture Org., -1997. 108p.
4.Taipakova S.M., Smailov B.B., Stanbekova G., Bissenbaev A. K. Cloning and expression of Lentinula edodes cellobiohydrolase gene in E. coli and characterization of recombinant enzyme // Journal of Cell and
Molecular biology.-Turkey, 2011. -Vol. 9. -№1. -P.53-63.
5.Taipakova S.M., Stanbekova G., Ischenko A., Saparbaev M., Bissenbaev A.K Cloning and expression of Lentinula edodes cellobiohydrolase CEL6B gene in E. coli // International Journal of chemistry and biology. -2011. -№1.-С.19-26.
6. Hon J., Tamaki H., Akiba S., Yamamoto K., Kumagai H. Cloning of Gene Encoding a Highly Stable Endo-β-1,4-Glucanase from Aspergillus niger and Its Expression in Yeast // J. BIOSCI. BIOENG.- 2001.- Vol. 92.-P. 434-441.
7. Nelson NJ. A photometric adaptation of the Somogyi method for the determination of glucose // J Biol Chem. -1944. -Vol.153. –P. 375-380.
8. Somogyi M. Notes on sugar determination // J Biol Chem. -1952. –Vol.195. –P. 19-23.
9. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein using the principle of protein–dye binding // Anal Biochem. -1976. –Vol.72. –P. 248-252.
2.Эрнст Л., Лаптев Г. Ферменты улучшают переваривание клетчатки // Животноводство России.-2006. -№10. -С. 36-38.
3.Miyamoto K. Renewable biological systems for alternative sustainable energy production // Food &Agriculture Org., -1997. 108p.
4.Taipakova S.M., Smailov B.B., Stanbekova G., Bissenbaev A. K. Cloning and expression of Lentinula edodes cellobiohydrolase gene in E. coli and characterization of recombinant enzyme // Journal of Cell and
Molecular biology.-Turkey, 2011. -Vol. 9. -№1. -P.53-63.
5.Taipakova S.M., Stanbekova G., Ischenko A., Saparbaev M., Bissenbaev A.K Cloning and expression of Lentinula edodes cellobiohydrolase CEL6B gene in E. coli // International Journal of chemistry and biology. -2011. -№1.-С.19-26.
6. Hon J., Tamaki H., Akiba S., Yamamoto K., Kumagai H. Cloning of Gene Encoding a Highly Stable Endo-β-1,4-Glucanase from Aspergillus niger and Its Expression in Yeast // J. BIOSCI. BIOENG.- 2001.- Vol. 92.-P. 434-441.
7. Nelson NJ. A photometric adaptation of the Somogyi method for the determination of glucose // J Biol Chem. -1944. -Vol.153. –P. 375-380.
8. Somogyi M. Notes on sugar determination // J Biol Chem. -1952. –Vol.195. –P. 19-23.
9. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein using the principle of protein–dye binding // Anal Biochem. -1976. –Vol.72. –P. 248-252.
Загрузки
Выпуск
Раздел
БИОТЕХНОЛОГИЯ
