Клонирование открытых рамок считывания М-вируса картофеля, кодирующих супрессоры РНК-интерференции. РНҚ-интерференцияның тежегіш-белоктарын кодтайтын картоп М вирусының ашық оқылатын рамкаларын клондау.

R. Kryldakov; B. Iskakov; G. Stanbekova; O. Karpova

Авторы

R. Kryldakov Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А.Айтхожина, Алматы
B. Iskakov Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А.Айтхожина, Алматы
G. Stanbekova Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А.Айтхожина, Алматы
O. Karpova Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А.Айтхожина, Алматы

Ключевые слова:

М-вирус картофеля (PVM), РНК-интерференция (RNAi), PVM белки – супрессоры RNAi, картоп М вирусы (PVM), РНҚ-интерференция (RNAi), тежегіш PVM белоктары,

Аннотация

ДНК двух открытых рамок считывания (ОРС3 и ОРС5) вируса картофеля М (PVM) были клонированы в Gateway-совместимый экспрессионный вектор pMDC32 под контролем двойного 35S промотора. Каждая из этих конструкций была введена путем электропорации в клетки Agrobacterium tumefaciens. Затем эти клетки были инфильтрованы в растения Nicotiana benthamiana линии 16C, которые тестировались на проявление активности, супрессирующей РНК-интерференцию. Далее последовательности ОРС3 и ОРС5 были клонированы в прямой и обратной ориентации, для создания трансгенных растений, устойчивых к PVM. Картоп М вирусының М (PVM) ашық оқылатын екі рамкаларының (ОРС3 және ОРС5) ДНҚ-дары Gateway- мен үйлесімді қосқабат 35S промоторының бақылауындағы экспрессиялайтын pMDC32 векторына клондалды. Олардың екеуі де РНК-интерференцияның тежегіш әрекеттілігі пайда болуына тексерілген Agrobacterium benthamiana-ның 16C линиясы жасушаларына электротесу әдісімен енгізілді. Осыдан кейін ОРС3 және ОРС5 тізбектері PVM-ға төзімді трансгендік өсімдіктер шығару үшін түзу және теріс бағытта клондалды.