Клонирование кДНК-фрагментов геномной рнк М-вируса картофеля, кодирующих потенциальные супрессоры РНК-интерференции. РНҚ-интерференцияның ықтимал басқыштарын кодтайтын картоп М-вирусының геномдық РНҚ-ның кДНҚ-бөліктерін клондау

R. Kryldakov; O. Karpova; G. Stanbekova; B. Iskakov

Авторы

R. Kryldakov Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина, г.Алматы, Казахстан
O. Karpova Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина, г.Алматы, Казахстан
G. Stanbekova Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина, г.Алматы, Казахстан
B. Iskakov Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А. Айтхожина, г.Алматы, Казахстан

Ключевые слова:

М-вирус картофеля (PVM), РНК-интерференция (RNAi, клонирование ОРС гРНК PVM, PVM белкисупрессоры RNAi.картоптың М-вирусы (PVM), РНК-интерференция (RNAi), PVM гРНҚ АОБ клондау, PVM RNAi басқыш белоктары.

Аннотация

В настоящей работе амплифицированы 3'-проксимальные открытые рамки считывания (ОРС25К, ОРС12К,ОРС7К, ОРС34К и ОРС11К) геномной (г)РНК М-вируса картофеля (PVM). Проведено клонирование амплифицированных фрагментов с использованием Gateway-технологии сначала в бактериальном (pDONR207),а затем в растительном (pMDC32) векторе под контролем двойного 35S промотора. Этот этап работы посвящён амплификации целевых фрагментов гРНК PVM и их клонированию для последующей трансформации агробактерий и ко-инфильтрации растений, с целью идентификации вирусных белков – супрессоров RNAi. Осы жұмыста кері транскрипция (КТ) жəне полимераздық тізбекті əрекеті(ПТƏ) көмегімен 3'-ұшына жақын ашық оқылатын PVM геномдық (г)РНҚ бөліктері (ОРС25К, ОРС12К, ОРС7К, ОРС34К и ОРС11К) көбейтілді.Gateway-технологияны пайдаланып көбейтілген бөліктер қосарланған 35S промоторы бақылауымен бастапқыда бактерия (pDONR207), одан кейін өсімдік векторында (pMDC32) клондалды. Жұмыстың бұл кезеңі кейін вирус белоктары арасында ықтимал RNAi супрессорларын айқындау мақсатымен өсімдіктерді агробактериялармен трансформациялауға жəне соинфильтрациялауға арналған.