КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ кДНК ЭНДО-Β-1,4-ГЛЮКОНАЗЫ ГРИБА ASPERGILLUS NIGER В E.COLI

А. С. Тастанова; А. Ж. Акбасова; С. М. Тайпакова; А. К. Бисенбаев

Автор(и)

А. С. Тастанова ДГП «Научно-исследовательский институт проблем биологии и биотехнологии» КазНУ им. аль-Фараби
А. Ж. Акбасова ДГП «Научно-исследовательский институт проблем биологии и биотехнологии» КазНУ им. аль-Фараби
С. М. Тайпакова ДГП «Научно-исследовательский институт проблем биологии и биотехнологии» КазНУ им. аль-Фараби
А. К. Бисенбаев ДГП «Научно-исследовательский институт проблем биологии и биотехнологии» КазНУ им. аль-Фараби

Ключові слова:

vector pET11d, EG enzymes,

Анотація

Проведена амплификация кДНК эндоглюконазы гриба Aspergillus niger IFO31125 помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Ген клонирован под контролем регулируемого промотора фага Т7 векора pET11d и трансформирован в компетентных клетках E.coli Rosetta (DE3). Экспрессия гена eng1 был показан с помощью ДСН-ПААГ электрофореза и определения ферментативной активности. Рекомбинантный фермент проявляет оптимальную активность при рН 6. Оптимальная температура фермента 50 оС. EG аморфты целлюлозаның гидролизіне жауапты целлюлазалық кешен ферменттерінің маңызды құрамдас бөлігі болып табылады. Aspergillus niger IFO31125 саңырауқұлағының eng1 кДНҚ молекуласы Е. coli клеткасында клондалды. Клондау əдісі сайт спецификалық праймерлерді қолдану арқылы ПТР əдісі көмегімен кДНК молекуласын амплификациялау арқылы жүзеге асырылды. ПТР өнімі Т7 фагы промоторы бақылауында pET11d векторында клондалды жəне E. Coli клеткасының рекомбинантты штаммында eng1 генінің экспрессиясы көрсетілді.