Синтез белка оболочки L1RΔ вируса оспы овец в растениях. Өсімдіктерде қой шешегі вирусы қабықшасының L1RΔ ақуызының синтезі

Анотація

Ген SPPV-NISKHI-56 вируса оспы овец кодирует ортолог иммунодоминантного белка L1R вируса повакцины. Последовательность гена, кодирующая гидрофильную часть белка (L1RΔ) была искусственно синтезирована и клонирована в плазмиду pET-19b для экспрессии в бактериях. Для трансформации растений табака (Nicotiana tabacum L. cv. Samsun-NN) была получена рекомбинантная ДНК-конструкция на основе вектора pCAMBIA2300, содержащая 35S промотор вируса мозаики цветной капусты (CaMV), 5'НТП гРНК AMV, His-Tag, ген белка L1RΔ и терминатор транскрипции гена нопалин синтазы (NOS-ter). Трансформированные растения - регенеранты, образовавшие корни на среде с канамицином, были проверены с помощью реакции обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) на наличие соответствующей мРНК. Рекомбинантный белок удалось детектировать в нескольких трансгенных растениях с помощью специфических антител к белку L1RΔ. Қой шешегі вирусының SPPV-NISKHI-56 гені адам шешегі вирусының L1R иммундық доминантты ақуыз ортологын кодтайды. Ақуыздың гидрофилді бөлігін (L1RΔ) кодтайтын геннің тізбегі жасанды синтезделіп, бактерияларда экспрессиясы үшін pET-19b плазмидаға клондалған. Темекі өсімдігінің (Nicotiana tabacum L. Cv. Samsun-NN) трансформациясы үшін 35S промотор CaMV, 5’AMV, His-Tag, L1RΔ ақуызының гені және транскрипцияның терминаторынан (NOS-ter) құралатын pCAMBIA2300 векторы негізінде рекомбинатты ДНҚ-құрылымы алынды. Транформацияланған өсімдік канамицин бар ортада түзілген тамырларының регенеранты, олар сәйкес мРНҚ-ның болуына қатысты кері транскрипция (КТ-ПТР) реакциясы көмегімен тексерілді. Рекомбинантты ақуызды L1RΔ ақуызына арнайы антиденелер көмегімен бірқатар трансгенді өсімдіктерде анықталды.