Выделение и характеристика кДНК гена апурин/апиримидиновой эндонуклеазы Triticum aestivum. Triticum aestivum апурин/апиримидиндік эндонуклеаза ферментін (ТаАpe1L) кодтайтын кДНК генді бөліп алу жəне сипаттау

  • B. Zholdybaeva НИИ проблем биологии и биотехнологии
  • Z. Akishev Казахский Национальный университет имени аль-Фараби
  • M. Saparbaev Казахский Национальный университет имени аль-Фараби
  • A. Bissenbaev Казахский Национальный университет имени аль-Фараби

Аннотация

С использованием tBLASTn поисковой системы базы данных NCBI по гомологии к АП-эндонуклеазе человека и арабидопсиса идентифицирован ген, кодирующий предполагаемую АП-эндонуклеазу Triticum aestivum (ТаАpe1L). Впервые выделена кДНК гена АП-эндонуклеазы пшеницы с помощью ОТ-ПЦР.Осуществлена функциональная экспрессия TaAPE1L с гистидиновым концом в E. coli и очищена посредством никель-хелатной хроматографии до гомогенного состояния. С помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии установлена принадлежность рекомбинантного белка к АП-эндонуклеазам. С использованием 5'-[P32] -меченных олигонуклеотидных дуплексов, содержащих единственный тетрагидрофуран – аналог АП сайта,выявлена АП-эндонуклеазная активность TaAPE1L.

NCBI деректер базасының tBLASTn іздеу бағдарламасын пайдалана отырып адам мен арабидопсистің АП-эндонуклеазасына гомологиясы бойынша Triticum aestivum АП-эндонуклеаза ферментін (ТаАpe1L) кодтайтын ген анықталды. Бидай АП-эндонуклеаза ферментін кодтайтын кДНҚ ген КТ-ПТР көмегімен бөліп алынды.6xHis соңды TaAPE1L E. coli жүйесінде экспрессияланып, никель-хелаттық хроматография көмегімен гомогенді күйде тазартылып алынды. MALDI-TOF масс-спектрометрия көмегімен рекомбинантты белоктың
АП-эндонуклеаза ферментіне жататындығы анықталды. АП сайттың жалғыз тетрагидрофуран аналогы бар 5'-[P32] - таңбаланған олигонуклеотидтік дуплекстерді пайдалана отырып, TaAPE1L рекомбинантты белогының АП-эндонуклеазалық белсенділігі анықталды.

Литература

1. Cadet J., Douki T., Gasparutto D., Ravanat J.L. Oxidative damage to DNA: formation, measurement and biochemical
features // Mutat. Res. - 2003. - №531. - P.5-23.

2. Hoeijmakers J. DNA damage, aging, and cancer // N. Engl. J. Med. - 2009. - №2009361. – P.1475-1485.

3. Cordoba-Canero D., Roldan-Arjona T., Ariza R. Arabidopsis ARP endonuclease functions in a branched base excision
DNA repair pathway completed by LIG1 // Plant J. - 2011. - №68. - P.693-702.

4. Sancar A., Lindsey-Boltz L., Unsal-Kacmaz K., Linn S. Molecular mechanisms of mammalian DNA repair and the DNA
damage checkpoints // Annu. Rev. Biochem. - 2004. - №73. - P.39-85.

5. Gros L., Saparbaev M.K., Laval J. Enzymology of the repair of free radicals induced DNA damage // Oncogene. - 2002. -
№21. - P.8905-8925.

6. Hitomi K., Iwai S., Tainer J.A. The intricate structural chemistry of base excision repair machinery: implications for DNA
damage recognition, removal, and repair // DNA Repair (Amst). - 2007. - №6. - P.410-428.

7. Ischenko A.A., Saparbaev M.K. Alternative nucleotide incision repair pathway for oxidative DNA damage // Nature. -2002. - №415. - P.183-187.

8. Zharkov D.O. Base excision DNA repair // Cell Mol .Life Sci. - 2008. - №65. -P.1544-1565.

9. Babiychuk E., Kushnir S., Van Montagu M., Inze D. The Arabidopsis thaliana apurinic endonuclease Arp reduces human
transcription factors Fos and Jun // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1994. - №91. - P.3299-3303.

10. McRae E. Extraction of RNA // Methods in molecular biology. - 2007. -№353. - P.15-24.

11. Frosina G., Fortini P., Rossi O., Carrozzino F., Raspaglio G., Cox L.S., Lane D.P., Abbondandolo A., Dogliotti E. Two
pathways for base excision repair in mammalian cells // J. Biol. Chem. - 1996. - №271. - P.9573-9578.
Как цитировать
ZHOLDYBAEVA, B. et al. Выделение и характеристика кДНК гена апурин/апиримидиновой эндонуклеазы Triticum aestivum. Triticum aestivum апурин/апиримидиндік эндонуклеаза ферментін (ТаАpe1L) кодтайтын кДНК генді бөліп алу жəне сипаттау. Вестник КазНУ. Серия биологическая, [S.l.], v. 59, n. 3/1, p. 256-261, apr. 2015. ISSN 2617-7498. Доступно на: <https://bb.kaznu.kz/index.php/biology/article/view/757>. Дата доступа: 21 jan. 2021
Раздел
Физико-химическая биология и нанотехнологии

Ключевые слова

АП-эндонуклеазы; TaAPE1L; пшеница.АП-эндонуклеаза; TaAPE1L; бидай.

Наиболее читаемые статьи этого автора (авторов)

Особенность: этот модуль требует, что бы был включен хотя бы один модуль статистики/отчетов. Если ваши модули статистики возвращают больше одной метрики, то пожалуйста также выберите главную метрику на странице настроек сайта администратором и/или на страницах настройки управляющего журналом.