Выделение и характеристика кДНК гена апурин/апиримидиновой эндонуклеазы Triticum aestivum. Triticum aestivum апурин/апиримидиндік эндонуклеаза ферментін (ТаАpe1L) кодтайтын кДНК генді бөліп алу жəне сипаттау

Анотація

С использованием tBLASTn поисковой системы базы данных NCBI по гомологии к АП-эндонуклеазе человека и арабидопсиса идентифицирован ген, кодирующий предполагаемую АП-эндонуклеазу Triticum aestivum (ТаАpe1L). Впервые выделена кДНК гена АП-эндонуклеазы пшеницы с помощью ОТ-ПЦР.Осуществлена функциональная экспрессия TaAPE1L с гистидиновым концом в E. coli и очищена посредством никель-хелатной хроматографии до гомогенного состояния. С помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии установлена принадлежность рекомбинантного белка к АП-эндонуклеазам. С использованием 5'-[P32] -меченных олигонуклеотидных дуплексов, содержащих единственный тетрагидрофуран – аналог АП сайта,выявлена АП-эндонуклеазная активность TaAPE1L. NCBI деректер базасының tBLASTn іздеу бағдарламасын пайдалана отырып адам мен арабидопсистің АП-эндонуклеазасына гомологиясы бойынша Triticum aestivum АП-эндонуклеаза ферментін (ТаАpe1L) кодтайтын ген анықталды. Бидай АП-эндонуклеаза ферментін кодтайтын кДНҚ ген КТ-ПТР көмегімен бөліп алынды.6xHis соңды TaAPE1L E. coli жүйесінде экспрессияланып, никель-хелаттық хроматография көмегімен гомогенді күйде тазартылып алынды. MALDI-TOF масс-спектрометрия көмегімен рекомбинантты белоктың АП-эндонуклеаза ферментіне жататындығы анықталды. АП сайттың жалғыз тетрагидрофуран аналогы бар 5'-[P32] - таңбаланған олигонуклеотидтік дуплекстерді пайдалана отырып, TaAPE1L рекомбинантты белогының АП-эндонуклеазалық белсенділігі анықталды.