Сравнение трансляционных энхансеров при синтезе in vitro белков оболочки A27L и L1R вируса оспы овец. Қой шешегі вирусы қабықшасының A27L мен L1R белоктары in vitro түзілгенде трансляциялық энхансерлерін салыстыру
Ключевые слова:
энхансеры трансляции мРНК, бесклеточная система растений, синтез in vitro белков оболочки A27L и L1R, вирус оспы овец. мРНҚ трансляцияның күшейткіштер, бидай ұрығының жүйесі, қабықшасының A27L мен L1R белоктарды in vitro синтездеу, қой шешегі вирусы.Аннотация
Работа посвящена сравнению эффективности вирусных и искусственных усилителей трансляции (энхансеров) при синтезе белков оболочки A27L и L1R вируса оспы овец в бесклеточной системе из зародышей пшеницы. Для сравнения использовались 5'-нетранслируемые последовательности (НТП) геномных РНК Y вируса картофеля (PVY), вируса гравировки табака (TEV), геномной РНК-4 вируса мозаики люцерны (AMV),искусственная нуклеотидная последовательность 5xARC1, а также 3'-НТП геномной РНК вируса табачной мозаики (TMV). Оценка эффективности усиления трансляции проводилась флуориметрически с помощью репортерного белка β-глюкуронидазы (GUS) и с помощью иммуноблотинга белков A27L и L1R. Показано, что анализируемые 5'-НТП значительно повышают синтез белков в сравнении с произвольной нуклеотидной последовательностью (pl), не обладающей свойствами трансляционного энхансера. Жұмыс қабықшасының A27L мен L1R белоктары in vitro бидай ұрығының жүйесінде түзілгенде вирустардың жəне жасанды трансляциялық күшейткіштерінің (энхансерлерінің) тиімділігіне арналған.Салыстыру үшін картоп Ү вирусының геномдық РНҚ (PVY), темекі қырнақшы вирусының (TEV),жоңышқа əшекей вирусының геномдық РНҚ-4 (AMV), 5xARC1 жасанды тізбегі, жəне темекі əшекей вирусының геномдық РНҚ (TMV) пайдаланылды. Трансляция күшейуінің тиімділігі репортерлік белок β- глюкуронидазаның (GUS) флуориметриясы жəне A27L мен L1R белоктары иммуноблотингі көмегімен өткізілді. Сыналған 5'-ТТ, белоктар түзілуін трансляциялық энхансер қасиеті жоқ кездейсоқ жасалған нуклеотид тізбегімен (pl) салыстырғанда, əжептəуір өсіреді.Библиографические ссылки
1 Bailey-Serres J. Selective translation of cytoplasmic mRNAs in plants // Trends in Plant Science. – 1999. – V.4. -No.4. – P. 142-148.
2 Hellen Ch.U.T., Sarnow P. Internal ribosome entry sites in eukaryotic mRNA molecules // Genes Dev. – 2001. –
V.15. – P.1593-1612.
3 Орлова Е.С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз. – Диссертация на соискание
ученой степени кандидата биологических наук. –Владимир, 2007. – 6 с.
4 Mangana-Vougiouka, O. Sheep poxvirus identification from clinical specimens by PCR, cell culture,
immunofluorescence and agar gel immunoprecipitation assay // Molecular and Cellular Probes. – 2000. – V.14. -No5. –P.305-310.
5 Gallie D.R., Feder J.N., Schimke R.T., Walbot V. Post-transcriptional regulation in higher eukaryotes: The role of the
reporter gene in controlling expression // Mol.Gen.Genet. – 1991. –V.228. – P. 258-264.
6 Gurevich. V., Pokrovskaya I.D., Obukhova T.A. Preparative in vitro mRNA synthesis using SP6 and T7 RNA
polymerases // Anal.Biochem. – 1991. –V.195. – P. 207-213.
7 Akbergenov R.Zh., Zhanybekova S.Sh., Kryldakov R.V., Zhigailov A.V., Polimbetova N.S., Hohn T., Iskakov B.K.
ARC-1, a sequence element complementary to an internal 18S rRNA segment, enhances translation efficiency in plants
when present in the leader or intercistronic region of mRNAs // Nucleic Acids Research. – 2004. – V.32. – No.1. – P.239-247.
8 Johnston F.B., Stern H. Mass isolation of viable wheat embryo // Nature. – 1957. – No.179. – P. 160-161.
9 Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning (a laboratory manual). -New York: Cold Spring Harbor
Lab.Press, 1989, V.3. – 545 р.
2 Hellen Ch.U.T., Sarnow P. Internal ribosome entry sites in eukaryotic mRNA molecules // Genes Dev. – 2001. –
V.15. – P.1593-1612.
3 Орлова Е.С. Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз. – Диссертация на соискание
ученой степени кандидата биологических наук. –Владимир, 2007. – 6 с.
4 Mangana-Vougiouka, O. Sheep poxvirus identification from clinical specimens by PCR, cell culture,
immunofluorescence and agar gel immunoprecipitation assay // Molecular and Cellular Probes. – 2000. – V.14. -No5. –P.305-310.
5 Gallie D.R., Feder J.N., Schimke R.T., Walbot V. Post-transcriptional regulation in higher eukaryotes: The role of the
reporter gene in controlling expression // Mol.Gen.Genet. – 1991. –V.228. – P. 258-264.
6 Gurevich. V., Pokrovskaya I.D., Obukhova T.A. Preparative in vitro mRNA synthesis using SP6 and T7 RNA
polymerases // Anal.Biochem. – 1991. –V.195. – P. 207-213.
7 Akbergenov R.Zh., Zhanybekova S.Sh., Kryldakov R.V., Zhigailov A.V., Polimbetova N.S., Hohn T., Iskakov B.K.
ARC-1, a sequence element complementary to an internal 18S rRNA segment, enhances translation efficiency in plants
when present in the leader or intercistronic region of mRNAs // Nucleic Acids Research. – 2004. – V.32. – No.1. – P.239-247.
8 Johnston F.B., Stern H. Mass isolation of viable wheat embryo // Nature. – 1957. – No.179. – P. 160-161.
9 Maniatis T., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning (a laboratory manual). -New York: Cold Spring Harbor
Lab.Press, 1989, V.3. – 545 р.
Загрузки
Выпуск
Раздел
БИОТЕХНОЛОГИЯ: ОТ ИССЛЕДОВАНИЙ К ИННОВАЦИЯМ
