Использование иммунопреципитации при изучении белок-белковых взаимодействий хроматина. Хроматиннің ақуыз-ақуызды әсерін зерттеуде иммунопреципитация әдісін пайдалану

Анотація

Для обнаружения и описания белок-белковых взаимодействий исследователи используют несколько методов.Среди них существует особая категория методов, основанных на in vivo мечении белков, находящихся в пространственной близости друг от друга (проксимальное мечение). В настоящей работе мы предлагаем новую методику иммунопреципитации хроматина, заключающуюся в проксимальном биотинилировании белков, находящихся в непосредственной пространственной близости друг от друга, с последующей нативной иммунно-преципитацией хроматина. Данная методика позволяет изучать белковый состав хроматина, проксимального любому ядерному белку. Метод основан на коэкспрессии интересующего нас белка, «сшитого» с бактериальной биотин-лигазой, и гибридного гистона, содержащего биотин-акцептор. Этот метод является на сегодняшний день одним из немногих in vivo методов для изучения белок-белковых взаимодействий хроматина. Ақуыз-ақуызды әсерлерді анықтап, сипаттау үшін біршама зерттеулер жүргізіліп, түрлі әдістер пайдаланылды. Олардың ішінде ақуыздарды in vivo проксималды таңбалайтын ерекше әдістер санаты бар. Ұсынылып отырған жұмыста біз хроматинді иммунопреципитациялау әдісін ұсынамыз. Бұл әдістің негізінде хроматинді преципитациялау негізінде ақуыздарды проксималды биотинирлеу жатады. Берілген әдіс кез келген ядролық ақуыздарға жақын орналасқан хроматиннің ақуызды құрамын анықтауға мүмкіндік береді. Әдіс қажетті ақуыздың коэкспрессиясына байланысты. Онда бактериалды биотин-лигаза құрамында биотинді акцепторы бар гибридті гистондармен байланысуға негізделген. Бұндай әдіс қазіргі таңда хроматиннің ақуыз-ақуызды әсерін in vivo жағдайында зерттейтін бір ғана әдіс болып табылады.