КЛОНИРОВАНИЕ КДНК-ГЕНА РИБОСОМНОГО БЕЛКА S6 ИЗ ARABIDOPSIS THALIANA, ЕГО ЭКСПРЕССИЯ В ESCHERICHIA COLI И ВЫДЕЛЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА ATRPS6A1 (Experimental biology, 2022)
Рибосомный белок S6 (RPS6) является компонентом эукариотических 40S-рибосомных субъединиц (40S-RSu), который регулирует трансляцию определенных видов мРНК. Поскольку RPS6 – единственный белок 40S-RSu, способный к фосфорилированию, он и является одной из мишеней для регуляции биосинтеза белков у эукариот. Есть указание на то, что рибосомы с наиболее высоким уровнем фосфорилирования RPS6 создают селективные преимущества при трансляции мРНК, кодирующих большую часть белковых компонентов трансляционного аппарата клеток. Понимание механизма регуляции биосинтеза у растений посредством фосфорилирования pRPS6 позволит повышать биомассу растений и их урожайность. В настоящей работе кДНК-ген AtRPS6A1, кодирующий рибосомный белок S6, клонирован в векторе pET19b. Этот ген экспрессирован в клетках Escherichia coli, а кодируемый им рекомбинантный белок PRS6 выделен методами ионной и аффинной (IMAC-) хроматографии, очищен диализом и сконцентрирован. Белок PRS6 будет использован в экспериментах in vitro для исследования молекулярных механизмов регуляции трансляции мРНК растений посредством его фосфорилирования и получения моноклональных антител к этому белку.
Keywords: фосфорилирование, клонирование, рекомбинантный белок, рибосомный белок S6 растений (pRPS6)