(untitled) (Experimental biology, 2025)
Было замечено, что в клетках растений, находящихся в состоянии стресса, 18S рРНК расщепляется как часть малой рибосомной субчастицы и накапливает 135-нуклеотидный 5’-терминальный фрагмент, называемый 5,3S рРНК. Однако физиологическое значение этого явления остается неизвестным. Целью данного исследования было изучить роль дискретной фрагментации 18S рРНК в растениях с помощью дрожжевого токсина PiORF4, который может вызывать аналогичное расщепление в дрожжах. В данной работе был создан мутированный кДНК-ген, кодирующий форму токсина PiORF4(E9D) с повышенной специфичностью для 18S рРНК. Мутированный ген был клонирован в вектор pET23c, после чего он был экспрессирован в клетках Escherichia coli штамма BL21(DE3). Полученный рекомбинантный белок PiORF4(E9D)-6His был успешно очищен с помощью металл-ионной аффинной хроматографии, а его идентификация была подтверждена иммуноблотингом. Кроме того, предварительные исследования in vitro продемонстрировали способность PiORF4(E9D) специфически воздействовать на 18S рРНК в контролируемых условиях, что подтверждает его потенциал в качестве модельной системы для изучения стресса растений.