Разработка ПЦР тест-системы для выявления Pyrenophora tritici-repensis

Анотація

В последние годы наблюдается заметное расширение ареала и вредоносности желтой пятнистости листьев в Казахстане. Широкому распространению и повышенной вредоносности патогена способствует высокая адаптивная способность гриба. Идентифицировать вид гриба по симптомам проявления болезни на листьях растений и по морфологическим признакам конидий довольно сложно. Создание отечественных диагностических средств для выявления возбудителя желтой пятнистости пшеницы Pyrenophora tritici-repensis является актуальной задачей. Среди молекулярных методов наиболее удобным и оперативным является метод ПЦР диагностики.  ПЦР позволяет обнаруживать грибковую ДНК еще до того, как физиологические симптомы становятся видимыми на растительной ткани.

Целью данной работы является разработка ПЦР тест-системы для диагностики желтой пятнистости пшеницы.

В результате проведенных исследований, были подобраны и синтезированы видоспецифичные праймеры для выявления возбудителя желтой пятнистости пшеницы, оптимизированы условия постановки ПЦР: состав реакционной смеси и температурно-временной режим. Определена специфичность и чувствительность тест-системы. Разработанная тест-система показала довольно высокую специфичность и позволяет выявлять нуклеиновую кислоту патогена в исследуемых образцах в количестве 2,6 пг. Данная тест-система может быть использована для оперативного обнаружения ДНК патогена в пробах.

 Ключевые слова: желтая пятнистость, ПЦР, специфичность, чувствительность, диагностика.