ПОЛУЧЕНИЕ БЫЧЬЕГО РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА В СИСТЕМЕ ESCHERICHIA COLI И ЕГО РЕФОЛДИНГ

Аннотация

Интерфероны – сигнальные белки, секретируемые клетками птиц и млекопитающих в ответ на вирусную инфекцию, которые активируют неспецифический противовирусный иммунный ответ. В последние годы препараты интерферонов показали свою эффективность в профилактике и лечении вирусных инфекций у человека и животных. Однако в Казахстане такие препараты не производятся и поставляются из других стран. Поэтому разработка отечественной технологии получения рекомбинантных интерферонов для сельскохозяйственных животных является важной задачей для укрепления ветеринарной безопасности Казахстана. В данной работе был клонирован ген бычьего α-интерферона (Bos taurus) и разработан продуцент рекомбинантного белка на основе бактерии Escherichia coli и были подобраны оптимальные условия его культивирования. Однако было установлено, что продуцируемый белок накапливается в тельцах включениях и не может быть выделен в нативных условиях. Соответственно, синтезированный рекомбинантный белок был выделен после растворения в буфере, содержащем 6 М гуанидинхлорид, а затем очищен и подвергнут рефолдингу с помощью металл-аффинной хроматографии на Ni-NTA-агарозе. Выход целевого белка после рефолдинга составил 3,3 мг с литра бактериальной культуры. Таким образом, был разработан лабораторный метод получения рекомбинантного бычьего α-интерферона. В дальнейшем планируется проведение испытаний противовирусной активности рекомбинантного белка и масштабирование технологии для промышленного производства отечественного препарата.