КЛОНИРОВАНИЕ, МУТИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ В КЛЕТКАХ ESHERICHIA COLI КДНК ГЕНА PIORF4 И ОЧИСТКА РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА PIORF4(E9D)-6HIS

Авторы

  • Т.С. Казанбасов РГП «Институт молекулярной биологии и биохимии им М.А. Айтхожина» КН МНВО РК, г. Алматы, Казахстан https://orcid.org/0009-0001-4991-102X
  • Б.К. Искаков РГП «Институт молекулярной биологии и биохимии им М.А. Айтхожина» КН МНВО РК, г. Алматы, Казахстан https://orcid.org/0000-0002-5204-4377
  • А.В. Жигайлов РГП «Институт молекулярной биологии и биохимии им М.А. Айтхожина» КН МНВО РК, г. Алматы, Казахстан https://orcid.org/0000-0002-9646-033X

DOI:

https://doi.org/10.26577/bb202510323
        0 0

Ключевые слова:

Генетическая конструкция, PiORF4, мутагенез in vitro, 18S рРНК, рекомбинантный белок.

Аннотация

Было замечено, что в клетках растений, находящихся в состоянии стресса, 18S рРНК расщепляется как часть малой рибосомной субчастицы и накапливает 135-нуклеотидный 5'-терминальный фрагмент, называемый 5,3S рРНК. Однако физиологическое значение этого явления остается неизвестным. Целью данного исследования было изучить роль дискретной фрагментации 18S рРНК в растениях с помощью дрожжевого токсина PiORF4, который может вызывать аналогичное расщепление в дрожжах. В данной работе был создан мутированный кДНК-ген, кодирующий форму токсина PiORF4(E9D) с повышенной специфичностью для 18S рРНК. Мутированный ген был клонирован в вектор pET23c, после чего он был экспрессирован в клетках Escherichia coli штамма BL21(DE3). Полученный рекомбинантный белок PiORF4(E9D)-6His был успешно очищен с помощью металл-ионной аффинной хроматографии, а его идентификация была подтверждена иммуноблотингом. Кроме того, предварительные исследования in vitro продемонстрировали способность PiORF4(E9D) специфически воздействовать на 18S рРНК в контролируемых условиях, что подтверждает его потенциал в качестве модельной системы для изучения стресса растений.

Биографии авторов

Т.С. Казанбасов, РГП «Институт молекулярной биологии и биохимии им М.А. Айтхожина» КН МНВО РК, г. Алматы, Казахстан

Kazanbassov Temirkhan Serikovich (corresponding author) – Laboratory assistant of the Laboratory of Protein and Nucleic Acids of RSE ‘IMBB’, student at the Department of Biotechnology, al-Farabi Kazakh National University (Almaty, Kazakhstan, email: temirhankazanbasov@gmail.com)

Б.К. Искаков, РГП «Институт молекулярной биологии и биохимии им М.А. Айтхожина» КН МНВО РК, г. Алматы, Казахстан

Ученая степень: Доктор биологических наук.

Ученое звание: Профессор.

А.В. Жигайлов, РГП «Институт молекулярной биологии и биохимии им М.А. Айтхожина» КН МНВО РК, г. Алматы, Казахстан

Andrey Viktorovich Zhigailov –  Head of the Laboratory of Protein and Nucleic Acids of RSE ‘IMBB’, Acting Head of the Laboratory of Molecular Biology of the Almaty Branch of the National Centre for Biotechnology, PhD, Associate Professor. (Almaty, Kazakhstan, email: andrzhig@gmail.com)

Загрузки

Как цитировать

Казанбасов T. ., Искаков B. ., & Жигайлов A. . (2025). КЛОНИРОВАНИЕ, МУТИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ В КЛЕТКАХ ESHERICHIA COLI КДНК ГЕНА PIORF4 И ОЧИСТКА РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА PIORF4(E9D)-6HIS: . Experimental Biology, 103(2), 34–43. https://doi.org/10.26577/bb202510323

Выпуск

Том 103 № 2 (2025): Вестник. Серия биологическая

Раздел

МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ И ГЕНЕТИКА

Наиболее читаемые статьи этого автора (авторов)