РАЗРАБОТКА И ТЕСТИРОВАНИЕ ГРНК ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСА ХЛОРОТИЧЕСКОЙ ПЯТНИСТОСТИ ЛИСТЬЕВ ЯБЛОНИ И ВИРУСА ЯМЧАТОСТИ ДРЕВЕСИНЫ ЯБЛОНИ

Аннотация

В данном исследовании представлен всесторонний отчет о развитии и использовании направляющих РНК (гидовых РНК) посредством использования систем CRISPR/Cas для идентификации двух известных вирусов яблок, а именно вируса хлоротической пятнистости листьев яблок (ACLSV) и вируса ямчатости древесины яблони (ASPV). Наличие этих вирусов представляет значительные риски для мировой индустрии производства яблок из-за их неблагоприятного воздействия на качество и урожайность плодов. Основной целью данного исследования является изучение использования технологии CRISPR, а именно систем CRISPR/Cas12a и Cas13a, при использовании для точных и высокочувствительных диагностических приложений. Настоящая методология фокусируется на использовании консервативных областей в вирусном геноме для повышения эффективности обнаружения.

Методология включает разработку направляющих РНК (гРНК), которые селективно связываются с консервативными областями в вирусных геномах ACLSV и ASPV. Это достигается путем применения методов биоинформатики, которые направлены на снижение непреднамеренных эффектов связывания и повышение специфичности нацеливания направляющих РНК. Первый этап тестирования in vitro включает производство синтетической вирусной РНК, за которым следует тестирование живых растений для проверки эффективности gRNA в реальных условиях. Кроме того, цель исследования включает в себя создание полных клонов кДНК вирусов для улучшения понимания их геномной архитектуры, что является критическим аспектом в улучшении конструкций gRNA.

В работе подчеркивается важность включения сложных геномных методологий наряду с традиционными подходами вирусологии для улучшения идентификации и контроля вирусных заболеваний растений. Цель состоит в том, чтобы повысить сельскохозяйственное благосостояние и производительность путем разработки новых диагностических стратегий.