Новый быстрый метод определения молибден ксантиноксидазы молока животных

  • K. A. Dusembaev Евразийский национальный университет им. Л.Н.Гумилева, Республика Казахстан, г. Астана
  • M. S. Kulataeva Евразийский национальный университет им. Л.Н.Гумилева, Республика Казахстан, г. Астана
  • G. A. Shalakhmetova Казахский национальный университет им. аль-Фараби, Республика Казахстан, г. Алматы
  • Z. Alikulov Евразийский национальный университет им. Л.Н.Гумилева, Республика Казахстан, г. Астана

Аннотация

Изучение нитратредуктазной (НаР) и нитритредуктазной (НиР) активностей молибден содержащего фермента, ксантиноксидазы (КО) показало, что в козьем, верблюжьем и кобыльем  молоке КО находится в безмолибденовой и неактивной форме. Нами предложен метод активирования  КО молока экзогенным молибденом и тиолами при термообработке молока при 85оС в течение 10 минут. Атомы Mo связываются с сульфгидрильными (-SH) группами молибденового кофактора в активном центре КО. Однако при термоденатурации фермента прогреванием эти  SH-группы окисляются кислородом. Поэтому, во время термообработки молока использовались различные антиоксиданты для защиты SH-групп кофактора. НаР и НиР активности КО определяется только количеством нитрита: (1) для НаР, нитрит является продуктом каталитической реакции, и (2) для НиР, нитрит является субстратом.  Для определения количества нитрита используются сульфаниламид и N-(1-нафтил)-этилендиамин. Нами было обнаружено, что в присутствии фосфата, антиоксидантов, дитиотрейтола, аскорбата и дитионита экзогенный молибдат окрашивался сульфаниламидом в синий цвет (максимум поглощения 695 нм). При использовании цистеина или глутатиона в качестве антиоксидантов, молибдат не окрашивался сульфаниламидом, т.е. они не мешали определению нитрита. Используя дитиотрейтол, фосфат и сульфаниламид  установлено включение экзогенного молибдата в молекулу КО мицелл жировых глобул сливки.

Биографии авторов

##submission.authorWithAffiliation##
Дюсембаев К.А. – магистр биотехнологии, научный сотрудник лаборатории клеточной биологии и биотехнологии кафедры биотехнологии и микробиологии Евразийского национального университета им. Л.Н.Гумилева, Астана
##submission.authorWithAffiliation##
Кулатаева М.С. - магистрант кафедры биотехнологии и микробиологии Евразийского национального университета им. Л.Н.Гумилева, Астана
##submission.authorWithAffiliation##
Шалахметова Г.А. –и.о.доцента  кафедры молекулярной биологии и генетики Казахского национального университета им. Аль-Фараби, Алматы
##submission.authorWithAffiliation##
Аликулов З. – и.о.профессора кафедры биотехнологии и микробиологии Евразийского национального университета им. Л.Н.Гумилева, Астана

Литература

Литература

1. Beedham C. Molybdenum hydroxylases // In: Costas Ioannidis. (ed.) Enzyme systems that metabolize drug and xenobiotics.- John Wiley & Sons Ltd, 2001.- P.146-188
2. Blot W.J., Li J.Y., Taylor P.R . Nutrition intervention trials in Linxian, China: supplementation with specific vitamin/mineral combinations, cancer incidence and disease-specific mortality in the general population // J Natl Cancer Inst.- 1993.-N 85. – Р.1483-1942.
3. Brewer G.J., Dick R.D., Grover D.K. Treatment of metastatic cancer with tetrathiomolybdate, an anticopper, antiangiogenic agent: Phase I study.//ClinCancerRes. -2000.-N6. –Р.1-10.
4. Lopez-Garcia I., Vinas P., Romero-Romero R., Hernandez-Cordoba M. Liquid chromatography–electrothermal atomic absorption spectrometry for the separation and preconcentration of molybdenumin milk and infant formulas // Analytica Chimica Act.-2007.-N597.-P.187-194.
5. Flavia Regina de Amorim, Milton Batista Franco, Clesia Cristina Nascentes, Jose Bento Borba da Silva . Direct Determination of Molybdenum in Milk and Infant Food Samples Using Slurry Sampling and Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrometry // Food Anal Methods.- 2011.-N 4.-P. 41-48.
6. Щепина Н.Д. Новые химические модификаторы при электротермическом атомно-абсорбционном определении молибдена в молоке // Вестник Донецкого национального университета. Природные науки. -2012.- № 2.- C.152-156.
7. Аликулов З.А, Львов Н.Л, Кретович В.Л. Нитрат-и нитритредуктазная активность ксантиноксидазы молока // Биохимия.- 1980.- № 9.- С.1714-1719.
8. Аликулов З.A. Антагонизм между молибденом и вольфрамом в биологических системах.// Вестник ЕНУ им. Гумилева.- 2008.- № 67. – С. 57-63.
9. Пупышев А.А. Атомно-абсорбционный спектральный анализ. - М.: Техносфера, -2009. — 784 с.
10. Godber B.L., Schwarz G., Mendel R., Lowe D., Bray R., Eisenthal R., Harrison R. Molecular characterization of Human Xanthine Oxidase: The enzyme is grossly deficient in molybdenum and substially deficient in iron-sulphur cеnters// Biochemical Journal.- 2005.-N 17 . -P. 1-29.
11. Atmani D., Benboubetra M., Harrison R. (). Goat’s milk xanthine oxidoreductase is grossly deficient in molybdenum// J.Dairy Res.-2004.-N71.- P.7-13.

References

1. Beedham C. (2001) Molybdenum hydroxylases. In: Costas Ioannidis (ed.) Enzyme systems that metabolize drug and xenobiotics. John Wiley & Sons Ltd., рр.146-188.
2. Blot WJ, Li JY, Taylor PR (1993) Nutrition intervention trials in Linxian China: supplementation with specific vitamin/mineral combinations, cancer incidence and disease-specific mortality in the general population. J Natl Cancer Inst, 85:1483-1942.
3. Brewer GJ, Dick RD, Grover DK (2000) Treatment of metastatic cancer with tetrathiomolybdate, an anticopper, antiangiogenic agent: Phase I study. ClinCancerRes, 6:1-10.
4. Lopez-Garcia I, Vinas P, Romero-Romero R, Hernandez-Cordoba M (2007) Liquid chromatography–electrothermal atomic absorption spectrometry for the separation and preconcentration of molybdenumin milk and infant formulas. Analytica Chimica Acta, 597:187-194.
5. Flavia Regina de Amorim, Milton Batista Franco, Clesia Cristina Nascentes, Jose Bento Borba da Silva (2011) Direct Determination of Molybdenum in Milk and Infant Food Samples Using Slurry Sampling and Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrometry. Food Anal Methods , 4: 41-48.
6. Shepina ND (2012) New chemical modifiers in the electrothermal atomic absorption determination of molybdenum in milk. Bulletin of Donetsk National University Natural science [Novyiye chimicheskie modifikatory pri elektrotermicheskom atomno-absorbcionnom opredelenii molibdena v moloke. Vestnik Doneckogo nacionalnogo universiteta. Prirodnyiye nauki] 2:152-156 (In Russian)
7. Alikulov Z , Lvov N, Kretovich V. (1980) Nitrate and nitrite reductase activity of xanthine oxidase milk. Biochemistry [Nitrat i nitritreduktaznaya aktivnost ksantinoksidazy moloka]. 45 (9): 1714-1719 (In Russian)
8. Alikulov ZA (2008) Antagonism between molybdenum and tungsten in biological systems. Bulletin of ENU [Antagonizm mezhdu molibdenom I volframomv biologicheskih sistemah] 6 67:57-63 . (In Russian)
9. Pupyeshev AA. Atomic absorption spectral analysis –M : Technosphere-2009-784p. (In Russian)
10. Godber BL , Schwarz G, Mendel R, Lowe D, Bray R, Eisenthal R, Harrison R. (2005). Molecular characterization of Human Xanthine Oxidase: The enzyme is grossly deficient in molybdenum and substially deficient in iron-sulphur cеnters. Biochemical Journal Immediate Publication,17: 1-29.
11. Atmani D, Benboubetra M, Harrison R. (2004). Goat’s milk xanthine oxidoreductase is grossly deficient in molybdenum. J.Dairy Res, 71:7-13.
Как цитировать
DUSEMBAEV, K. A. et al. Новый быстрый метод определения молибден ксантиноксидазы молока животных. Вестник КазНУ. Cерия биологическая, [S.l.], v. 68, n. 3, p. 134-142, oct. 2016. ISSN 1563-0218. Доступно на: <http://bb.kaznu.kz/index.php/biology/article/view/1210>. Дата доступа: 23 sep. 2017
Раздел
БИОХИМИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

Ключевые слова

нитратредуктаза; нитритредуктаза; ксантиноксидаза; молоко; молибден; дитиотреитол; сульфаниламид;

Наиболее читаемые статьи этого автора (авторов)

Особенность: этот модуль требует, что бы был включен хотя бы один модуль статистики/отчетов. Если ваши модули статистики возвращают больше одной метрики, то пожалуйста также выберите главную метрику на странице настроек сайта администратором и/или на страницах настройки управляющего журналом.